1.色譜柱信息
Inertsil Diol是在高純度硅膠基質上鍵合二羥丙基的色譜柱,正相模式下,比單純的硅膠柱對化合物的選擇性更強,可以實現極性接近的化合物群的分離,主要用于一些脂溶性、中等極性或者極性較大的非離子性化合物的分離。Inertsil Diol液相色譜柱從硅膠基質的合成,到化學處理和裝填后的性能檢測,都是在本公司嚴格的產品控制下進行,因此不同批次的柱與柱之間具有優(yōu)異的重現性;通過獨有的裝填技術填裝的氰基柱柱床密度均一穩(wěn)定,從而確保色譜柱具有高柱效。
為了能長期保持Inertsil® Diol液相色譜柱的優(yōu)越性能和正確的使用色譜柱,在使用色譜柱之前請仔細閱讀本說明書。
2.使用前的檢查與須知事項
●檢查包裝箱的外觀有無異常。
●打開包裝,檢查色譜柱的填料名稱、尺寸規(guī)格、連接形式是否相符。
●色譜柱中封存流動相為正己烷/乙醇=98:2,v/v。
3.色譜柱填料規(guī)格
4.色譜柱安裝與操作
色譜柱在運輸過程中,兩端用堵頭密封。當將色譜柱接入色譜儀器系統時,首先請確保系統中的溶劑和液相柱中封存溶劑是互溶的。如果不能互溶,請采用一種能夠與系統及色譜柱都能互溶的溶劑(e.g.異丙醇)對系統進行充分過渡之后再將色譜柱連接到系統中,并注意流動相的方向要與柱上標記的方向保持一致。我公司提供的常規(guī)液相色譜柱標準接頭型式為
1/16英寸Waters接頭螺絲型(如下左圖),同時還有耐高壓液相系統的UP型(如下右圖)(目前Diol柱暫不提供UPLC柱)。如果需要其他接頭形式請另行咨詢。
色譜柱連接好之后,請確認無漏液現象之后再進行后續(xù)操作。
新的Diol柱是保存在正己烷/乙醇(98:2,v/v)的溶液中,在儲存和運輸過程中,硅膠填料可能會干涸,用于正相分離模式,正相柱的平衡時間一般較長,直接用正己烷/乙醇(98:2,v/v)沖洗至少50倍柱體積活化,流速從0.1mL/min緩慢上升到最佳流速,然后用流動相平衡之后再進樣分析(如果在活化過程中即發(fā)現壓力和基線不正常時,請及時聯系我公司工程
師處理。)
5.樣品與流動相
為避免色譜柱堵塞,所有樣品及溶劑,包括緩沖溶液在內,在使用前必須用0.45μm或者0.22 μm的濾膜過濾。在正相色譜中,固定相的水分含量常常是影響選擇性的關鍵因素,大部分溶劑都內含有小部分的溶解水分(正己烷20℃水分含量是0.0111% w/w),如發(fā)現色譜柱保留性能發(fā)生變化,可用流動相低流速長時間充分平衡。
6.色譜柱的保養(yǎng)
●pH Diol柱可在pH2~7.5范圍內使用,為保持色譜柱良好的壽命,請避免較強的酸或堿性樣品或者流動相進入色譜柱。
●耐壓 常規(guī)柱耐受壓力為20MPa,HP系列耐壓為50MPa,但是正常的壓力建議控制在耐受壓力的2/3以下。長時間在高壓下運行會對色譜柱造成難以修復的損害,因此系統壓力升高之后,建議盡快排查系統,如果是色譜柱壓力升高,請及時采用適當溶劑沖洗色譜柱。
●溫度 最高操作溫度為60℃,長時間在高溫下操作會顯著降低色譜柱壽命。
●沖洗
正相模式清洗步驟:
1.每次清洗都用低流速起步,當檢測到柱壓穩(wěn)定在一定水平后再增加流速;
2.先用10倍柱體積不含其它添加劑的流動相中的弱溶劑,如正己烷、氯仿等沖洗色譜柱;
3.用50柱體積的諸如乙酸乙酯,二氯甲烷或異丙醇等流動相中的強溶劑沖洗色譜柱。
此外,也可以根據樣品基質特點,選擇對基質溶解性較強的溶劑沖洗。
●儲存 色譜柱長期不用,建議沖洗方法完成之后,正相分離模式保存在與出廠封存溶劑相同的流動相中;之后卸掉色譜柱,兩端用堵頭密封,并放在溫度變化小的場所。